Adenovirus pikatesti - nenän eritys

Käyttötarkoitus:

SARS-CoV-2 Nukleiinihappotestisarja on tarkoitettu COVID-19-nukleiinihapon kvalitatiiviseen havaitsemiseen nenänielun vanupuikoista, suunielun vanupuikoista ja ysköksestä. Testitulokset tarjoavat molekyylidiagnoosin perustan infektiolle tai epäillyille potilaille, eikä niitä tule käyttää kliinisen diagnoosin ainoana kriteerinä.

Materiaalit:

TESTAUSMENETTELY:

A. Näytteen valmistelu

Uutettu RNA on SARS-CoV-2-nukleiinihappotestisarjan lähtöaine.

Tärkeää: Jokainen nukleiinihappouuttotoimenpide on suoritettava samanaikaisesti yhden positiivisen kontrollin (40 μL, laimenna steriileillä suolaliuoksilla/PBS:llä haluttuun tilavuuteen) ja yhden negatiivisen kontrollin (40 μL, laimenna steriileillä suolaliuoksilla/PBS:llä haluttuun tilavuuteen) kanssa.

On suositeltavaa käyttää seuraavia kaupallisia nukleiinihappojen uuttopakkauksia: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viral RNA Mini Kit (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Reaktioseoksen asetukset

1. Kaikki reagenssit ja näytteet tulee sulattaa kokonaan, sekoittaa kokonaan ja sentrifugoida hetken huoneenlämmössä (noin 18-25 astetta) ennen käyttöä.

2. Valmista tarvittava määrä reaktioseosta sopivan kokoiseen polypropyleenimikrosentrifugiputkeen.

3. Pipetoi 25 µL reaktioseosta sopivan optisen 96-kuoppareaktiolevyn tai sopivan optisen reaktioputken jokaiseen vaadittuun kuoppaan.

C. Mallin lisäys

1. Lisää 5 μL näytteistä/positiivisesta kontrollista/negatiivisesta kontrollista uutettua RNA:ta. Kokonaistilavuus on 30 μl.

2. Sekoita näytteet ja kontrollit perusteellisesti reaktioseoksen kanssa pipetoimalla ylös ja alas/Vortex.

3. Sulje 96-kuoppareaktiolevy asianmukaisilla kansilla tai optisella liimakalvolla ja reaktioputket asianmukaisilla kansilla.

4. Sentrifugoi 96-kuoppareaktiolevyä sentrifugissa, jossa on mikrotiitterilevyn roottori, 30 sekuntia noin 2500 rpm:ssä.

D. Reaaliaikaisen PCR-laitteen ohjelmointi

Perustietoa eri reaaliaikaisten PCR-instrumenttien asetuksista ja ohjelmoinnista löytyy kunkin laitteen käyttöohjeesta. Määritys on optimoitu ABI7500 Real-Time PCR -järjestelmää varten. PCR-ajo suoritetaan alla olevassa taulukossa kuvattujen sykliolosuhteiden mukaisesti.

Määritä fluoresenssiilmaisimet

*Aseta instrumentin sisäiseksi fluoresenssin viitearvoksi "Ei mitään", esimerkiksi: ABI-sarjan instrumenteille aseta "Passive Reference" -arvoksi "Ei mitään".

E. Tietojen analyysi

Aseta analyysiparametrit ja analysoi tiedot asiaankuuluvien instrumenttien käyttöohjeiden mukaisesti.

Otetaan esimerkkinä ABI 7500:

Perustaso on asetettava alueelle, joka eliminoi taustafluoresenssin, joka havaitaan vahvistuksen varhaisissa jaksoissa, mutta joka ei mene päällekkäin sen alueen kanssa, jossa vahvistussignaalit nousevat taustan yläpuolelle (aloitusarvo: 3–10; loppuarvo: {{2} }). Cycle Threshold (Ct) -arvon tulee olla eksponentiaalisen vaiheen pohjassa. Napsauta "Analysis" saadaksesi analyysituloksen automaattisesti ja lue tunnistustulos "Raportti"-ikkunassa.

Suositut Tagit: adenovirus pikatesti - nenän eritys, Kiina, toimittajat, valmistajat, tehdas, irtotavarana